调控骨桥蛋白介导的中性粒细胞浸润减轻脓毒症小鼠肺损伤的研究

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-6880.2022.03.008

目的

探讨骨桥蛋白（OPN）中和抗体处理对脓毒症小鼠生存情况的影响及其加剧急性肺损伤的机制。

方法

将80只雄性小鼠分成假手术组（Sham组）、脓毒症组[盲肠结扎穿孔术（CLP）组]、阴性对照组[CLP+免疫球蛋白G（IgG）组]及OPN中和抗体组（CLP+ OPN Ab组），每组各20只。采用CLP制备脓毒症小鼠模型，Sham组除不结扎和穿刺盲肠外，其余手术步骤相同。建模成功即刻，CLP+ IgG组及CLP+ OPN Ab组小鼠分别经颈内静脉注射IgG和OPN单抗，Sham组和CLP组注射等量磷酸盐缓冲液。每组10只用于观察小鼠活动状态及术后7 d存活情况；另外10只分别于术后24 h采集眼眶血及收集肺组织用于OPN及髓过氧化物酶（MPO）检测。比较4组小鼠血清、肺组织OPN信使RNA（mRNA）水平和肺组织中OPN蛋白水平，外周血丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）、白细胞介素6（IL-6）、趋化因子配体2（CXCL-2）和MPO活性。

结果

术后第7天，Sham组小鼠10只均存活；CLP组及CLP+ IgG组分别有2只存活，而CLP+ OPN Ab组仍有4只小鼠存活。4组小鼠7 d存活情况比较，差异有统计学意义（χ² = 17.374，P = 0.001）。且与Sham组相比，CLP组、CLP+ IgG组和CLP+ OPN Ab组小鼠存活情况均显著降低（P均< 0.05）；而CLP组、CLP+ IgG组和CLP+ OPN Ab组小鼠存活情况比较，差异均无统计学意义（P均> 0.05）。CLP术后24 h，4组小鼠血清、肺组织OPN mRNA水平和肺组织中OPN蛋白水平，外周血中ALT、AST、LDH、IL-6、CXCL-2、MPO活性比较，差异均有统计学意义（F = 84.227、51.929、41.563、19.558、55.416、75.968、32.824、176.945、119.046，P均< 0.05）。进一步两两比较发现，CLP组、CLP+ IgG组和CLP+ OPN Ab组小鼠血清、肺组织OPN mRNA水平和肺组织中OPN蛋白水平，外周血中ALT、AST、LDH、IL-6、CXCL-2、MPO活性均较Sham组显著增高，且CLP组和CLP+ IgG组更高（P均< 0.05）。

结论

OPN单抗中和OPN可调控脓毒症小鼠肺内中性粒细胞浸润，减轻急性损伤，提示OPN可作为脓毒症急性肺损伤的治疗靶点。

关键词: 脓毒症, 骨桥蛋白, 肺损伤, 中性粒细胞, 炎症因子

表1 OPN和β-actin引物序列

基因	序列（5’→3’）
OPN	正向引物：TCTCGCTTCGGCAGCACA
OPN	反向引物：ACTCCTGCTTGCTGATCCAC
β-actin	正向引物：TCCGATGATCACCAGGAT
β-actin	反向引物：GTGCAGGGTGCAAGGTAGC

表1 OPN和β-actin引物序列

基因	序列（5’→3’）
OPN	正向引物：TCTCGCTTCGGCAGCACA
OPN	反向引物：ACTCCTGCTTGCTGATCCAC
β-actin	正向引物：TCCGATGATCACCAGGAT
β-actin	反向引物：GTGCAGGGTGCAAGGTAGC

图1 各组小鼠血清、肺组织OPN水平及7 d存活情况的比较注：OPN.骨桥蛋白；CLP.盲肠结扎穿孔术；IgG.免疫球蛋白G；Sham组为假手术组；CLP组为脓毒症组；CLP+ IgG组为阴性对照组；CLP+ OPN Ab组为OPN中和抗体组；与Sham组比较，^aP < 0.05；与CLP组比较，^bP < 0.05；与CLP+ IgG组比较，^cP < 0.05

图2 各组小鼠肺损伤指标及炎症因子水平的比较注：CLP.盲肠结扎穿孔术；IgG.免疫球蛋白G；OPN.骨桥蛋白；ALT.丙氨酸转氨酶；AST.天冬氨酸氨基转移酶；LDH.乳酸脱氢酶；IL-6.白细胞介素6；CXCL-2.趋化因子配体2；Sham组为假手术组；CLP组为脓毒症组；CLP+ IgG组为阴性对照组；CLP+ OPN Ab组为OPN中和抗体组；与Sham组比较，^aP < 0.05；与CLP组比较，^bP < 0.05；与CLP+ IgG组比较，^cP < 0.05

图3 各组小鼠肺内中性粒细胞浸润情况的比较注：MPO活性以酶标仪检测450 nm处吸光度值表示；CLP.盲肠结扎穿孔术；IgG.免疫球蛋白G；OPN.骨桥蛋白；MPO.髓过氧化物酶；Sham组为假手术组；CLP组为脓毒症组；CLP+ IgG组为阴性对照组；CLP+ OPN Ab组为OPN中和抗体组；与Sham组比较，^aP < 0.05；与CLP组比较，^bP < 0.05；与CLP+ IgG组比较，^cP < 0.05

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Modulation of bone bridging protein-mediated neutrophil infiltration to reduce lung injury in septic mice

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