温肾健脾方对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞nephrin和podocin表达的影响

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-6880.2017.04.003

中华危重症医学杂志(电子版) ›› 2017, Vol. 10 ›› Issue (04) : 224 -229. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-6880.2017.04.003

所属专题：文献；

营养与代谢

温肾健脾方对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞nephrin和podocin表达的影响

陈霞波¹^,^†(

), 龚文波¹, 陈民利², 张业¹

^1. 315010　浙江宁波，宁波市中医院内分泌科
^2. 310053　杭州，浙江中医药大学动物实验研究中心

收稿日期:2017-05-26 出版日期:2017-08-01
通信作者: 陈霞波
基金资助:
浙江省中医药科学研究基金计划项目(2012ZB143); 宁波市中医重点学科中西医结合内分泌科基金项目(2016-Z01)

Effect of warming kidney and spleen recipe on the expressions of nephrin and podocin in glomerular podocyte of diabetic nephropathy rats

Xiabo Chen¹^,^†(), Wenbo Gong¹, Minli Chen², Ye Zhang¹

^1. Department of Endocrinology, Ningbo Muntcipal Hospital of Traditional Chinese Medicine, Ningbo 315010, China
^2. Department of Animal Experiment Research Center, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China

Received:2017-05-26 Published:2017-08-01
Corresponding author: Xiabo Chen
About author:
Corresponding author: Chen Xiabo, Email: cxbzyy@163.com

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引用本文：

陈霞波, 龚文波, 陈民利, 张业. 温肾健脾方对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞nephrin和podocin表达的影响[J/OL]. 中华危重症医学杂志(电子版), 2017, 10(04): 224-229.

Xiabo Chen, Wenbo Gong, Minli Chen, Ye Zhang. Effect of warming kidney and spleen recipe on the expressions of nephrin and podocin in glomerular podocyte of diabetic nephropathy rats[J/OL]. Chinese Journal of Critical Care Medicine(Electronic Edition), 2017, 10(04): 224-229.

目的

观察温肾健脾方对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞nephrin和podocin表达的影响。

方法

将链脲佐菌素诱导的30只糖尿病肾病模型大鼠分为五组，每组各6只，即模型对照组（等渗NaCl溶液10 mL·kg^-1·d^-1）、阳性对照组（缬沙坦25 mg·kg^-1·d^-1）及低剂量组（温肾健脾方7.5 g·kg^-1·d^-1）、中剂量组（温肾健脾方15 g·kg^-1·d^-1）和高剂量组（温肾健脾方30 g·kg^-1·d^-1），并以6只正常大鼠作正常对照组（等渗NaCl溶液10 mL·kg^-1·d^-1）。各组大鼠连续灌胃8周后，分别采用免疫组织化学法和荧光定量PCR检测各组大鼠肾小球足细胞nephrin和podocin蛋白及mRNA的表达。

结果

免疫组织化学结果显示，六组大鼠肾脏组织足细胞nephrin和podocin蛋白表达比较，差异均有统计学意义（F = 6.656、8.667，P = 0.016、0.007）。进一步两两比较发现，模型对照组足细胞nephrin和podocin蛋白表达量均较正常对照组降低（P均< 0.05）；与模型对照组比较，中、高剂量组nephrin和podocin蛋白表达量均升高（P均< 0.05），而低剂量组仅podocin蛋白表达量较模型对照组有所升高（P < 0.05）；与阳性对照组相比，低、中、高剂量组仅podocin蛋白表达量均较阳性对照组升高（P均< 0.05）。荧光定量PCR结果显示，六组大鼠肾脏组织足细胞nephrin和podocin mRNA相对表达量比较，差异均有统计学意义（F = 5.412、3.308，P = 0.034、0.015）；进一步两两比较发现，模型对照组足细胞nephrin和podocin mRNA相对表达量较正常对照组均显著降低（P均< 0.05）；与模型对照组比较，中、高剂量组及阳性对照组nephrin和podocin mRNA的相对表达量均显著升高（P均< 0.05），而低剂量组仅podocin mRNA相对表达量有所升高（P < 0.05）；与阳性对照组相比，仅低剂量组nephrin mRNA相对表达量有所降低（P < 0.05）。

结论

温肾健脾方对肾小球足细胞nephrin和podocin有不同程度的保护作用，从而维持肾小球的正常滤过功能，减轻尿蛋白排泄率，以达到防治糖尿病肾病的目的。

关键词: 温肾健脾方, 糖尿病肾病, nephrin, podocin

Objective

To observe the effect of warming kidney and spleen recipe on the expressions of nephrin and podocin in glomerular podocyte of diabetic nephropathy rats.

Methods

Thirty diabetic nephropathy rats induced by streptozotocin were randomly divided into 5 groups, which were the model control group (10 mL·kg^-1·d^-1 isotonic sodium chloride solution), positive control group (25 mL·kg^-1·d^-1 valsartan), low dose group (7.5 g·kg^-1·d^-1 warming kidney and spleen recipe), medium dose group (15 g·kg^-1·d^-1 warming kidney and spleen recipe) and high dose group (30 g·kg^-1·d^-1 warming kidney and spleen recipe) with 6 rats in each group, and 6 normal rats were served as the normal control group (10 mL·kg^-1·d^-1 isotonic sodium chloride solution). Then the nephrin and podocin proteins and mRNA expressions in glomerular podocytes of rats in each group were detected by immunohistochemistry and fluorescence quantitative PCR respectively, after all rats were given intragastric administration for 8 weeks.

Results

Immunohistochemistry results showed that the expressions of nephrin and podocin proteins in podocytes of rats in six groups were statistically different (F = 6.656, 8.667; P = 0.016, 0.007). The expressions of nephrin and podocin proteins in podocytes of rats in the model control group were lower than those in the normal control group (all P < 0.05). Compared with the model control group, the nephrin and podocin expressions in medium and high dose groups increased (all P < 0.05), while the podocin protein expression in the low dose group was higher than that in the model control group (P < 0.05). In addition, podocin proteins expressions in the low, medium and high dose groups were higher as compared with the positive control group (all P < 0.05). The results of quantitative PCR showed that the relative expressions of nephrin and podocin mRNA in podocytes of rats in six groups were statistically different (F = 5.412, 3.308, P = 0.034, 0.015). Compared with the normal control group, the relative expressions of nephrin and podocin mRNA in podocytes in the model control group were significantly lower (all P < 0.05). Furthermore, the relative expressions of nephrin and podocin mRNA in medium and high dose groups and the positive control group significantly increased than those in the model control group (all P < 0.05), while the relative expression of podocin mRNA only increased in the low dose group (P < 0.05). At the same time, the relative expression of nephrin mRNA only decreased in the low dose group as compared with the positive control group (P < 0.05).

Conclusion

Warming kidney and spleen recipe could provide a protective effect for nephrin and podocin in glomerular podocyte, which suggested that it might maintain the normal glomerular filtration function and reduce the urinary protein excretion rate in order to prevent and treat diabetic nephropathy.

Key words: Warming kidney and spleen recipe, Diabetic nephropathy, Nephrin, Podocin

表1 各组大鼠足细胞nephrin与podocin蛋白表达的比较（μm²， ± s）

组别	只数	药物与剂量	nephrin阳性面积（× 10³）	podocin阳性面积（× 10³）
正常对照组	6	等渗NaCl溶液（10 mL·kg^-1·d^-1）	51 ± 6	118 ± 9
模型对照组	6	等渗NaCl溶液（10 mL·kg^-1·d^-1）	19 ± 5^a	54 ± 7^a
阳性对照组	6	缬沙坦（25 mg·kg^-1 ·d^-1）	27 ± 6	67 ± 8
低剂量组	6	温肾健脾方（7.5 g·kg^-1·d^-1）	29 ± 8	99 ± 10^bc
中剂量组	6	温肾健脾方（15 g·kg^-1·d^-1）	32 ± 6^b	102 ± 10^bc
高剂量组	6	温肾健脾方（30 g·kg^-1·d^-1）	31 ± 6^b	104 ± 9^bc
F值	?	?	6.656	8.667
P值	?	?	0.016	0.007

表1 各组大鼠足细胞nephrin与podocin蛋白表达的比较（μm²， ± s）

组别	只数	药物与剂量	nephrin阳性面积（× 10³）	podocin阳性面积（× 10³）
正常对照组	6	等渗NaCl溶液（10 mL·kg^-1·d^-1）	51 ± 6	118 ± 9
模型对照组	6	等渗NaCl溶液（10 mL·kg^-1·d^-1）	19 ± 5^a	54 ± 7^a
阳性对照组	6	缬沙坦（25 mg·kg^-1 ·d^-1）	27 ± 6	67 ± 8
低剂量组	6	温肾健脾方（7.5 g·kg^-1·d^-1）	29 ± 8	99 ± 10^bc
中剂量组	6	温肾健脾方（15 g·kg^-1·d^-1）	32 ± 6^b	102 ± 10^bc
高剂量组	6	温肾健脾方（30 g·kg^-1·d^-1）	31 ± 6^b	104 ± 9^bc
F值	?	?	6.656	8.667
P值	?	?	0.016	0.007

图1 各组大鼠足细胞蛋白nephrin免疫组织化学结果图。注：a图为正常对照组，显示肾小球中有较多棕色强阳性信号，代表nephrin蛋白表达较多；b图为模型对照组，显示空泡化肾小球内棕色阳性信号明显减少；c图为阳性对照组，显示棕色阳性信号较模型对照组有所增加；d~f图分别为为低、中、高剂量组，显示肾小球中棕色阳性信号随温肾健脾方浓度升高逐渐增强，面积增多（免疫组织化学染色　× 400）

图2 各组大鼠足细胞蛋白podocin免疫组织化学图。注：a图为正常对照组，显示肾小球中有大量棕色强阳性信号，代表podocin蛋白强表达；b图为模型对照组，显示棕色阳性信号显著减少；c图为阳性对照组，显示棕色阳性信号较模型对照组有所增加；d~f图分别为为低、中、高剂量组，显示棕色阳性信号随温肾健脾方浓度升高逐渐增强（免疫组织化学染色　× 400）

表2 各组大鼠足细胞nephrin和podocin mRNA表达的比较（相对表达量， ± s）

组别	只数	药物与剂量	nephrin	podocin
正常对照组	6	等渗NaCl溶液（10 mL·kg^-1·d^-1）	1.10 ± 0.23	0.98 ± 0.14
模型对照组	6	等渗NaCl溶液（10 mL·kg^-1·d^-1）	0.33 ± 0.08^a	0.37 ± 0.12^a
阳性对照组	6	缬沙坦（25 mg·kg^-1· d^-1）	0.77 ± 0.11^b	0.72 ± 0.11^b
低剂量组	6	温肾健脾方（7.5 g·kg^-1·d^-1）	0.50 ± 0.10^c	0.61 ± 0.09^b
中剂量组	6	温肾健脾方（15 g·kg^-1·d^-1）	0.73 ± 0.10^b	0.69 ± 0.11^b
高剂量组	6	温肾健脾方（30 g·kg^-1·d^-1）	0.98 ± 0.24^b	0.86 ± 0.10^b
F值	?	?	5.412	3.308
P值	?	?	0.034	0.015

表2 各组大鼠足细胞nephrin和podocin mRNA表达的比较（相对表达量， ± s）

组别	只数	药物与剂量	nephrin	podocin
正常对照组	6	等渗NaCl溶液（10 mL·kg^-1·d^-1）	1.10 ± 0.23	0.98 ± 0.14
模型对照组	6	等渗NaCl溶液（10 mL·kg^-1·d^-1）	0.33 ± 0.08^a	0.37 ± 0.12^a
阳性对照组	6	缬沙坦（25 mg·kg^-1· d^-1）	0.77 ± 0.11^b	0.72 ± 0.11^b
低剂量组	6	温肾健脾方（7.5 g·kg^-1·d^-1）	0.50 ± 0.10^c	0.61 ± 0.09^b
中剂量组	6	温肾健脾方（15 g·kg^-1·d^-1）	0.73 ± 0.10^b	0.69 ± 0.11^b
高剂量组	6	温肾健脾方（30 g·kg^-1·d^-1）	0.98 ± 0.24^b	0.86 ± 0.10^b
F值	?	?	5.412	3.308
P值	?	?	0.034	0.015

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