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中华危重症医学杂志(电子版)

中华危重症医学杂志(电子版) ›› 2018, Vol. 11 ›› Issue (04) : 256 -259. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-6880.2018.04.008

所属专题： 文献；

论著

尿多酸肽通过调节caspase家族诱导多发性骨髓瘤细胞U266凋亡的实验研究
刘梅1, 孙菊1, 吴迪炯2, 俞庆宏2, 刘文宾2, 胡慧瑾2, 叶宝东,2   
  1. 1. 310053　杭州，浙江中医药大学第一临床医学院
    2. 310006　杭州，浙江中医药大学附属第一医院血液科
  • 收稿日期:2018-03-22 出版日期:2018-08-01
  • 通信作者: 叶宝东
  • 基金资助:
    浙江省卫计委创新人才资助计划项目(1S21702); 浙江中医药大学附属第一医院三鹰人才资助计划项目(ZD01601)

Uroacitide-induced multiple myeloma cells of U266 by regulating the caspases

Mei Liu1, Ju Sun1, Dijiong Wu2, Qinghong Yu2, Wenbin Liu2, Huijin Hu2, Baodong Ye,2   

  1. 1. The First School of Clinical Medicine, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China
    2. Department of Hematology, the First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310006, China
  • Received:2018-03-22 Published:2018-08-01
  • Corresponding author: Baodong Ye
  • About author:
    Corresponding author: Ye Baodong, Email:
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引用本文：

刘梅, 孙菊, 吴迪炯, 俞庆宏, 刘文宾, 胡慧瑾, 叶宝东. 尿多酸肽通过调节caspase家族诱导多发性骨髓瘤细胞U266凋亡的实验研究[J/OL]. 中华危重症医学杂志(电子版), 2018, 11(04): 256-259.

Mei Liu, Ju Sun, Dijiong Wu, Qinghong Yu, Wenbin Liu, Huijin Hu, Baodong Ye. Uroacitide-induced multiple myeloma cells of U266 by regulating the caspases[J/OL]. Chinese Journal of Critical Care Medicine(Electronic Edition), 2018, 11(04): 256-259.

目的

探讨尿多酸肽抑制多发性骨髓瘤（MM）细胞株U266增值及其机制。

方法

采用四甲基偶氮唑（MTT）比色法计算不同尿多酸肽浓度（1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mg/g）对U266细胞生长的抑制率，Hoechst33258染色观察尿多酸肽作用后的细胞凋亡情况，Annexin-V/碘化丙啶（PI）检测尿多酸肽作用6、12、24 h后与对照组细胞（加细胞未加药物）的细胞凋亡率。使用Western-blotting法检测caspase 8、caspase 3及其激活物在U266细胞株经尿多酸肽（4 mg/g）作用6、12、24 h后的表达改变。

结果

随着尿多酸肽浓度提高，U266细胞抑制率显著上升（F= 17.276，P< 0.001）。经尿多酸肽作用后，Hoechst33258荧光染色提示细胞核浓集及出现凋亡小体。Annexin-V/PI分析显示，尿多酸肽处理6、12、24 h后细胞凋亡率显著高于对照组细胞[（5.53 ± 0.28）%、（9.43 ± 1.78）%、（21.50 ± 2.45）%、（3.03 ± 0.11）%，F= 12.242，P<0.001]。同时，随着尿多酸肽作用时间延长，pro-caspase 8、pro-caspase 3表达明显下降（F= 18.241，P<0.001；F= 4.924，P= 0.005），而active-caspase 8、active-caspase 3表达明显上升（F= 22.322，P<0.001；F= 6.213，P= 0.002）。

结论

尿多酸肽可抑制U266细胞增殖，且可能通过caspase凋亡途径在其中起主要作用。

关键词: 尿多酸肽, U266, 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶, 多发性骨髓瘤, 细胞凋亡
Objective

To explore the effect of uroacitide on multiple myeloma (MM) cells of U266 and its mechanisms.

Methods

The inhibition ratio of different uroacitides (1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0 mg/g) on the growth of U266 cells was calculated by the methylthiazolyl tetrazolium (MTT) colorimetric assay. The apoptosis of U266 cells was observed by Hoechst33258 staining. Annexin-V/propidium iodide (PI) was used to detect the apoptosis rate of U266 cells with uroacitides at 6, 12, 24 h and cells without uroacitides. The Western-blotting method was used to test expressions of caspase 8, caspase 3 and their activators in U266 cells with uroacitides (4 mg/g) for 6, 12 and 24 h.

Results

The inhibition rate of U266 cells increased significantly as the concentration of uroacitides increased (F= 17.276, P<0.001). Condensed nuclei and apoptotic bodies were found in cells with uroacitides through Hoechst33258 fluorescence staining. Annexin-V/PI analysis showed that the apoptosis rate of cells with uroacitides at 6, 12, 24 h was much higher than that of cells without uroacitides [(5.53 ± 0.28)%, (9.43 ± 1.78)%, (21.50 ± 2.45)%, (3.03 ± 0.11)%, F= 12.242, P<0.001]. Meanwhile, the expressions of pro-caspase 8 and pro-caspase 3 decreased significantly (F= 18.241, P<0.001; F= 4.924, P= 0.005), and expressions of active-caspase 8, and active-caspase 3 increased (F=22.322, P<0.001; F= 6.213, P= 0.002) with prolonged time.

Conclusion

Uroacitides can inhibit the proliferation of U266 cells by influencing the caspase apoptosis pathway.

Key words: Uroacitides, U266, Caspases, Multiple myeloma, Apoptosis
图1 两组U266细胞染色图
图2 经尿多酸肽作用各时间点后caspase 8、caspase 3相关激活物表达电泳图
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