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中华危重症医学杂志(电子版)

中华危重症医学杂志(电子版) ›› 2017, Vol. 10 ›› Issue (02) : 76 -81. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-6880.2017.02.002

所属专题： 文献；

论著

乌司他丁对脓毒症大鼠肝脏保护作用及其抗肝细胞凋亡机制的研究
李雪娇1, 陈俊杰1, 王磊1, 王立峰1, 康健1, 李永宁1,†()   
  1. 1. 116001　辽宁大连，大连市大连医科大学附属第一医院急诊科
  • 收稿日期:2016-12-19 出版日期:2017-04-01
  • 通信作者: 李永宁
  • 基金资助:
    辽宁省自然科学基金(201403858)

Protective effect of ulinastatin on liver and its mechanism of inhibiting hepatocyte apoptosis in septic rats

Xuejiao Li1, Junjie Chen1, Lei Wang1, Lifeng Wang1, Jian Kang1, Yongning Li1,†()   

  1. 1. Department of Emergency, the First Affiliated Hospital of Medical University, Dalian 116011, China
  • Received:2016-12-19 Published:2017-04-01
  • Corresponding author: Yongning Li
  • About author:
    Corresponding author: Li Yongning, Email: lyn1009@126.com
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引用本文：

李雪娇, 陈俊杰, 王磊, 王立峰, 康健, 李永宁. 乌司他丁对脓毒症大鼠肝脏保护作用及其抗肝细胞凋亡机制的研究[J]. 中华危重症医学杂志(电子版), 2017, 10(02): 76-81.

Xuejiao Li, Junjie Chen, Lei Wang, Lifeng Wang, Jian Kang, Yongning Li. Protective effect of ulinastatin on liver and its mechanism of inhibiting hepatocyte apoptosis in septic rats[J]. Chinese Journal of Critical Care Medicine(Electronic Edition), 2017, 10(02): 76-81.

目的

探讨乌司他丁对脓毒症大鼠肝脏保护作用及其抗凋亡机制。

方法

30只雄性大鼠分成假手术组、脓毒症组及乌司他丁组，每组各10只。以盲肠结扎穿孔术（CLP）法制备脓毒症大鼠模型，假手术组除不结扎和穿刺盲肠外，其余手术步骤相同。建模成功后15 min乌司他丁组大鼠尾静脉注射乌司他丁（20万U/kg），假手术组和脓毒症组注射等量生理盐水。分别于术后6、12、24 h尾静脉采血用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。于术后24 h取大鼠肝组织通过苏木素-伊红（HE）染色检测组织病理变化。同时，采用免疫组化法检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3在肝组织内表达情况。

结果

术后6，12，24 h乌司他丁组及脓毒症组大鼠IL-1β（F = 5.723，P = 0.018；F = 12.969，P < 0.001；F = 4.956，P = 0.027）、TNF-α（F = 5.618，P = 0.020；F = 20.002，P < 0.001；F = 17.869，P < 0.001）水平明显高于假手术组，且脓毒症组更高。HE染色发现脓毒症组肝细胞肿胀明显，汇管区可见炎症细胞浸润，而乌司他丁组大鼠肝细胞及肝小叶仅结构出现轻度破坏现象。同时，乌司他丁组及脓毒症组Bax[（17.6 ± 2.2）、（30.2 ± 4.2）、（1.5 ± 0.8）]、Caspase-3蛋白[（10.54 ± 1.44）、（22.60 ± 1.86）、（0.86 ± 0.24）]表达显著高于假手术组，抗凋亡蛋白Bcl-2[（21.6 ± 1.6）、（10.2 ± 1.5）、（42.4 ± 2.9）]表达均低于假手术组，且脓毒症组Bax、Caspase-3表达更高，Bcl-2表达更低（P均< 0.05）。

结论

乌司他丁具有抑制炎症因子释放与抗凋亡双重功效，对肝脏细胞具有保护作用。

关键词: 脓毒症, 乌司他丁, 肝细胞, 细胞凋亡, 大鼠
Objective

To investigate the protective effect of ulinastatin on liver and its mechanism of inhibiting hepatocyte apoptosis in septic rats.

Methods

A total of 30 male SD rats were randomly divided into the sham group, sepsis group and ulinastatin group, 10 rats in each group. The model of sepsis was reproduced by cecal ligation and puncture (CLP), and rats in the sham group received celiotomy without ligation and puncture. Rats in the ulinastatin group were given ulinastatin by tail vein injection (200 000 U/kg) on 15 min after laparotomy, and rats in the sham group and sepsis group were injected with equivalence saline. The levels of interleukin-1β (IL-1β) and tumor necrosis factor alpha (TNF-α) were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) on 6, 12, 24 h after laparotomy. The liver tissue was observed by hematoxylin and eosin (HE) on 24 h after laparotomy. The apoptosis protein Bax and Bcl-2 and Caspase-3 expression in hepatic tissue were determined by immunohistochemistry.

Results

The levels of IL-1β (F = 5.723, P = 0.018; F = 12.969, P < 0.001; F = 4.956, P = 0.027) and TNF-α (F = 5.618, P = 0.020; F = 20.002, P < 0.001; F = 17.869, P < 0.001) in the ulinastatin group and sepsis group on 6, 12, 24 h after laparotomy were all much higher than those in the sham group, and were highest in the sepsis group. HE staining found that hepatocyte swelling obviously, inflammatory cellular infiltration at portal areas in the sepsis group, and hepatocyte and hepatic lobule only mild damage in the ulinastatin group. Meanwhile, the expression of Bax [(17.6 ± 2.2), (30.2 ± 4.2), (1.5 ± 0.8)] and Caspase-3 [(10.54 ± 1.44), (22.60 ± 1.86), (0.86 ± 0.24)] in the ulinastatin group and sepsis group increased markedly, the Bcl-2 [(21.6 ± 1.6), (10.2 ± 1.5), (42.4 ± 2.9)] decreased markedlyas compared with the sham group, and the expression of Bax and Caspase-3 increased most and Bcl-2 decreased most in the sepsis group (all P < 0.05).

Conclusion

Ulinastatin can protect the hepatocytes of rats with sepsis by inhibiting the inflammatory reaction and hepatocyte apoptosis.

Key words: Oral ulcer, Gels, Matrine, Bioadhesive gel, Rabbits
表1 三组大鼠各时间点血清TNF-α和IL-1β水平（ng/L， ± s）
组别 只数 IL-1β TNF-α
6 h 12 h 24 h 6 h 12 h 24 h
假手术组 10 41.3 ± 1.5 42.2 ± 1.5 39.8 ± 1.6 80.6 ± 2.1 79.6 ± 1.9 78.6 ± 1.5
脓毒症组 10 92.6 ± 2.5a 142.6 ± 2.8a 125.3 ± 2.5a 252.6 ± 14.6a 302.6 ± 18.5a 246.3 ± 13.7a
乌司他丁组 10 56.4 ± 1.8ab 85.2 ± 2.2ab 76.7 ± 1.7ab 122.6 ± 12.2ab 160.4 ± 14.3ab 108.4 ± 9.2ab
F值 ? 5.723 12.969 4.956 5.618 20.002 17.869
P值 ? 0.018 <0.001 0.027 0.020 <0.001 <0.001
图1 三组大鼠肝脏组织病理图。注：a为对照组，肝细胞形态结构正常；b为脓毒症组，肝细胞及肝小叶结构出现轻度破坏现象，大致结构正常；c为乌司他丁组，肝细胞水肿及坏死，肝索及肝窦消失，炎细胞浸润（HE染色　× 200）
图2 三组大鼠凋亡蛋白Bax表达情况分析。注：a为对照组，细胞结构正常，未见阳性表达；b为脓毒症组，Bax蛋白表达明显增加；c为乌司他丁组，在汇管区可见Bax蛋白表达（免疫组化染色　× 200）
图3 三组大鼠凋亡蛋白Caspase-3表达情况分析。注：a为对照组，细胞结构正常，未见阳性表达；b为脓毒症组，在汇管、肝索及肝窦区Caspase-3蛋白表达明显增加；c为乌司他丁组，在汇管区可见散在Caspase-3蛋白表达（免疫组化染色　× 400）
图4 三组大鼠Bcl-2表达情况分析。注：a为对照组，肝细胞大量阳性表达；b为脓毒症组，抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显减少；c为乌司他丁组，在肝小叶内可见Bcl-2蛋白表达（免疫组化染色　× 200）
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